Activitat enzimàtica CATALASA

Introducció: 
Valorarem de forma quantitativa l'activitat enzimàtica de la Catalasa del fetge de pollastre.La pràctica la dividirem en dos parts: -en la 1era observarem la diferència d'activitat de la catalasa en diferents                                               teixits animals i vegetals.
                                          -en la 2ona veurem la influència de determinants factors en l'act.enzimàtica

La catalasa és un enzim present en els peroxisomes de les cèl·lules animals i vegetals que s'encarrega d'eliminar l'aigua oxigenada que es forma en algunes reaccions del metabolisme. La reacció química és la següent:          

PART 1- Quin teixit presenta més activitat de la catalasa?

Materials:

• Patata
• Tomaquet
• Pastanaga
• Fetge
• Cor
• Aigua oxigenada al 3%
• Pinces
• Bisturí
• Tub d'assaig de coll ample
• Gradeta
• Aigua destil·lada

Procediment: 

1. Tallem un tros de patata, un de pastanaga, un de tomàquet, un de fetge i un de cor, TOTS de la mateixa mida i per que capiguen dins el tub d'assaig
2. Pesem tots els trossos dels diferents teixits i apuntem el seu pes (a nosaltres ens va donar: la patata 0,5 g, la pastanaga 0,4 g, el tomàquet 0'4g, el cor 0,7g i el cor també 0.7g)
3. Posarem els 5 teixits cadascún en un tub d'assaig diferent i tots amb 5ml d'aigua destil·lada i marquem amb un permanent el que hi ha en cada tub.
4. Posem 2ml d'aiguan oxigenada en cada tub i marquem l'alçada que assoleixen les bombolles en cadascun. Mesurarem l'alçada en mm.

Resultats:
Els teixits que presenten més activitat són els animals, i d'entre els dos el que més el fetge, després el cor. Els teixits vegetals presenten molta menys activitat que els animals, la patata la que més, després la pastanaga i el tomàquet casi be no presenta activitat, per no dir que no en presenta cap.

Preguntes: 
-Variable dependent i independent? 
La dependent és l'alçada de les bombolles i la independent són els diferents teixits.
-Problema que es vol investigar?
Quin teixit presenta més activitat de la catalasa?

PART 2- Com afecten diferents factors en l'activitat de la catalasa?

Materials:

• Fetge
• Aigua oxigenada al 3%
• Pinces
• Bisturí
• Tub d'assaig de coll ample
• Gradeta
• Pinzes de fusta
• Vec de bunsen i encenedor
• NaCl
• HCl al 10%
• Aigua destil·lada

Procediment: 

1. Tallem 4 trossos de fetge a temperatura ambient, TOTS de la mateixa mida i per que capiguen dins el tub d'assaig
2. Pesem tots els trossos i apuntem el seu pes (a nosaltres ens va donar: fetge 1 1,6g, el fetge 2 1,6g, el fetge 2 1'3g, el fetge 4 1,2g)
3. El primer tros de fetge el posem en un tub d'assaig amb 5ml d'aigua destil·lada. El segon tros de fetge el posem en una dissolució de NaCl durant 10min i el tercer tros també 10 minuts submergit pero en HCl. Per últim el cuart tros el bullim 10 min.
4. Finalment posem tots els trossos en els seus respectius tubs i amb 5ml d'aigua destil·lada.
5. Tallem l'últim tros de fetge que necessitarem en aquesta pràctica que està congelat, intentant que sigui de la mateixa mida que els altres i l'aboquem dins el seu tub d'assaig amb 5ml d'aigua destil·lada també
6. Posem 2ml d'aiguan oxigenada en cada tub i marquem l'alçada que assoleixen les bombolles en cadascun. Mesurarem l'alçada en mm.

Resultats:
Els teixits que presenten més activitat són els animals, i d'entre els dos el que més el fetge, després el cor. Els teixits vegetals presenten molta menys activitat que els animals, la patata la que més, després la pastanaga i el tomàquet casi be no presenta activitat, per no dir que no en presenta cap.

Preguntes: 
-Variable dependent i independent? 
La dependent és l'alçada de les bombolles i la independent les condicions en les que està el fetge.
-Problema que es vol investigar?
Com afecten diferents factors en l'activitat de la catalasa?
-Quina és la funció

Photo Lab Time

L16. CELLS ORGANELLS

                                       
                                          Chloroplasts of Vallisneria

                                          
                                           Carrot Chromoplasts : 100X

                                                     Potato amyloplasts, stained with lugol: 10 x 40 = 400X

                                                    Chromoplasts red cabbage: 15 x 10 = 150X

                                       
                                         Tomato Chromoplasts: 4 x 10= 40X

                                       
                                         Stoma of a red cabbage; 15 x 40= 600X

                                          
                                         Chromoplasts red cabbage; 15 x 40= 600X

               Potato amyloplasts, stained with lugol: 10 x 100 = 1000X

All the photos are taken from Maria Luna's blog because I was ill that day of class so I couldn't do this observations.  

L15. LIFE IN A DROP OF WATER

In this picture we can see a flagel, moving quickly through the water.

You can see the video: 

http://www.youtube.com/feature=player_embedded#t=30

L14. GRAM STAINING

1. Objectives

- Differenciate the yogurt bacteria and relate the staining procedure with the structure of the cells.

2. Material

- 1 Slide
- 1 Cover slip
- Tongs
- Needle
- Gram stain: crystal violet, iodine and safranin.
- Descolorize reagent: ethanol 96%
- Microscope
- Yogurt

3. Procedure

- PROKARIOTIC CELL OBSERVATIONS: Gram Stainning
1. Prepare a heat-fixed sample of the bacteria to be stained.
2. Cover the smear with crystal violet for an exposure of 1 min.
3. Rinse with distilled water.
4. Apply Iodine solution for 1 min.
5. Rinse the sample with distilled water.
6. Decolorize using ethanol. Drop by drop until the purple stops flowing. It is very important that you: wash immediately with distilled water.
7. Cover the sample with the safrain stain for an exposure time of 45 seconds.
8. Rinse the sample with distilled water.
9. Gently dry the slide with paper.

Gram-negative: stain pink of reddish color.
Gram-positive: stain purple color.

L.13 EPIDERMIS CELLS

1.  Objectives:

• Identify the shape of epidermis cells.
• Identify and explore the parts of a stoma.
• Measure dimensions of the entire cell and the stoma.

2. Materials:

•  1 Slide
•  1 Cover slip
•  Distilled water
•  10% Salt water
•  Scissors
•  Needle

3. Procedure:

Plant cells observation:

1. Cut the stalk of the leek.
2. In the place of the cut, pull out the transparent part of the epidermis and using forceps.
3. Using the brush, place the peel onto the slide containing a drop of tap water.
4. Take a cover slip and place it gently on the peel with the aid of a needle.
5. View it in the microscope.
6. Describe the change in the shape of the cells.
7. Draw a diagram with the parts of a stome: stoma,cell guards,epidermis cells.

Salt treatment:

1. Prepare a 10% of salt solution.
2. Put the salt with a dropper on the left part of the slide.
3. Place a piece of cellulose paper in the opposite part of the cover slip, and let the dissolution to go though your sample.

Conclusions and coment

4. Questions

1.        What is the major function of a cell membrane?

• Keep separate internal environment of the phospholipid layer and transport functions played by proteins. The combination of active transport and the passive transport endoplasmic make a selective barrier membrane that allows the cell differentiation medium.

2.      What is the major function of the cell wall?

• The cell wall protects the cell contents, and gives rigidity, works as a mediator in all relations of the cell with the environment and acts as a cellular compartment. In plants, defines the structure and provides support to the tissue and many more parts of the cell.

3.      How does salt affect the cells shape? And the stomes?

• Salt wrinkle cells and stomes (turgency)

L12. ANIMAL CELLS vs PLANT CELLS

Last Monday we compared animal and plant cells by looking trough the mycroscope. The objectives were to identify the major components of cells, differentiate between animal and plant celss and to measure dimensons of the entire cell and the nucleus.

1. Objectives

- Identify the major components of cells.
- Differenciate between animal and plant cells,
- Measure dimensions of the entire cell and the nucleous.

2. Materials

- Toothpick
- 2 Slides
- 2 Covers slips
- Distilled water
- Methylene blue
- Iodine
- Onion
- Glycerine
- Two whatch glasses
- Dropper
- Needle

3. Procedure

3.1 Plant cells observation:

1. Pour some distilled water into watch glass.
2. Peel off the leaf from half a piece of onion and using forceps, pull out a piece of transparent onion peel (epidermis) from the leaf.
3. Put the epidermis in the watch glass containing distilled water.
4. Take a few drops of iodine solution ( or safranin) in a dropper and transfer into another watch glass.
5. Using a brush ( or a needle), transfer the peel into the watch glass containing the dye, Let this remain in the safranin solution (or iodine) for 30 seconds, so that the peel is stained.
6. Take the peel from the iodine solution and place it in the watch glass containing distilled water.
7. Take a few drops of glycerine in a dropper and pour 2-3 drops at the center of a dry glass slide.
8. Using the brush, place the peel onto the slide containing glycerine.
9. Take a cover slip and place it gently on the peel with the aid of a needle.
10. Remove the extra glycerine using cellulose paper.
11. View it in microscope.

3.2 Plant cells observation:
1. Gently scrape the inner side of the cheek using a toothpick, wich will collect some cheek cells.
2. Place the cells on a glass slide that has water on it.
3. Mix the water and the cheek cells using a needle and spread them.
4. Dry the sample under the light to fix the sample on the slide,
5. Take a few drops of methylene blue solution using a dropper and add this to the mixture on the slide,
6. After 2-3 minutes remove any excess water and satin from the slide using cellulose paper.
7. Take a clean cover slip and lower it carefully on the mixture with the aid of a needle.
8. Using the top of the needle, press the cover slip gently to spread the epithetial cells,
9. Remove any extra liquid around the cover slip using cellulose paper.

4. Results

PLANT CELLS:

MRcell: 6,9/400= 0,017cm
0,17x10000= 172,5microns

MRnucleous; 400=0,7x10000/X
X=7000/400=17,5 microns

CHEEK CELLS:
400= 1,5x10000microns/X
X=1,5x10000microns/400=37,5

400=0,3x10000microns/X
X= 0,3x10000microns/400=7,5microns